Projetos concluídos
Projetos concluídos
2008 - 2010 - Expressão heteróloga de uma nova isoforma de citocromo P450 (CYP356A1) de ostra Crassostrea gigas
Descrição: Organismos da zona costeira são constantemente expostos a uma ampla variedade de contaminantes antropogênicos advindos de efluentes industriais, agrícolas e urbanos. Animais residentes nesse ecossistema, incluindo a ostra do Pacífico, utilizam-se de vários mecanismos de defesa contra a contaminação por xenobióticos, sintetizando proteínas de estresse (chaperonas moleculates), metalotioneínas (detoxificadoras de metal) e enzimas do sistema de biotransformação (detoxificadoras de compostos orgânicos), entre outras. Estas últimas são capazes de transformar compostos orgânicos em moléculas mais solúveis, e, portanto mais fácilmente excretáveis. O primeiro passo dessa via é geralmente catalizado pelas monooxigenases e seus produtos são subsequentemente conjugados com metabólitos endógenos. Citocromo P450 (CYP), monooxigenase contendo flavina (MOF), monoamina oxidase (MAO), glutationa S-transferase (GST) estão entre as principais enzimas envolvidas na biotransformação e são induzidas por poluentes, sendo propostas como biomarcadores moleculares de poluição. Recentemente, nosso grupo de pesquisa cadastrado no CNPq com o nome de Sistemas de defesas bioquímicas e moleculares em organismos expostos a contaminantes (Laboratório de Biomarcadores de Contaminação Aquática e Imunoquímica, Universidade Federal de Santa Catarina), em experimentos de exposição de ostras C. gigas ao esgoto doméstico não tratado, identificou genes que apresentaram um aumento na sua expressão nas brânquias destes animais (MEDEIROS et al., 2008; TOLEDO-SILVA et al., 2008). Os dados mostraram a superexpressão de uma nova isoforma de CYP, a qual foi classificada como CYP356A1, agrupada como um gene do Clan 2 de CYP de invertebrado (CYP17-like), que apresentou 32-36% de homologia com CYP17s de vertebrados e de 30-33%, com genes CYP1 e CYP2. A partir destes estudos surgiram várias questões de interesse ecotoxicológico, ambiental e mecanístico. Qual o papel biológico desta proteína? Esta proteína é de fato ex.
2008 - 2009 -Clonagem e seqüenciamento do gene da catalase em ostra do mangue Crassostrea rhizophorae
Descrição: A exposição dos organismos ao esgoto doméstico causa várias respostas, entre elas a ativação do sistema de defesas antioxidante, que age prevenindo o estresse oxidativo gerado por substâncias tóxicas. Este sistema de defesa consiste em enzimas antioxidantes como por exemplo, a catalase. A catalase é uma enzima oxidoredutase capaz de decompor duas moléculas de peróxido de hidrogênio (H2O2) em duas moléculas de água (H2O) e uma de oxigênio (O2), através da equação (2 H2O2 → 2 H2O + O2), removendo assim, a toxicidade do peróxido de hidrogênio. Ensaios moleculares e enzimáticos com a catalase são constantemente utilizados em estudos ecotoxicológicos sendo considerada um biomarcador clássico. Com base nos resultados obtidos em nosso laboratório mostrou-se necessária a obtenção da seqüência completa de nucleotídeos do gene da enzima catalase em C. rhizophorae, visto que ainda existem poucos genes descritos da espécie no banco de genes (Genebank). A obtenção da seqüência completa do gene da catalase possibilitará o desenvolvimento de ensaios moleculares como PCR quantitativos (Q-PCR), assim como a expressão da proteína codificada pelo gene e conseqüente produção de anticorpos específicos para catalase de C. rhizophorae. Considerando sua importância bioecológica torna-se importante a geração de dados sobre as sequências nucléicas de genes desta espécie visando estudos de biomonitoramento, no intuito de padronizar técnicas moleculares para complementar os resultados obtidos com os ensaios bioquímicos tradicionais. Através da execução deste projeto pretende-se contribuir para o desenvolvimento de indicadores de saneamento ambiental e saúde pública que possam ser utilizados para informar a comunidade e avaliar a qualidade de vida a partir de intervenções voltadas à proteção e recuperação dos mananciais, a fim de prevenir ou avaliar o impacto de eventos críticos que porventura possam ocorrer..
2007 - 2009 -Clonagem e sequenciamento do gene do receptor de vitamina D (VDR) no peixe Poecilia vivipara
Descrição: O presente trabalho realizou a clonagem e o sequenciamento do receptor de vitamina D do peixe Poecilia vivipara, a partir do RNA total extraído do fígado desse peixe. A seqüência completa obtida apresentou 1783pb e uma janela aberta de leitura de 1263pb, correspondendo a 420 aminoácidos que apresentaram 96% de identidade com o VDR de Paralichtys olivaceus. Na seqüência de aminoácidos deduzida foram identificados os domínios de ligação ao DNA e de ligação ao ligante, além disso, aminoácidos envolvidos no processo de ligação ao DNA, ao ligante e formação do heterodímero. O tecido que apresentou maior expressão do VDR em P.vivipara foi o cérebro. O VDR parece estar relacionado a regulação do fator crescimento de nervo, biossíntese de alguns neurotransmissores e neuroproteção nesse tecido. A análise filogenética demonstrou que o VDR de P.vivipara apresenta maior relação evolutiva com o VDR de Paralichtys olivaceus. .
2007 - Atual - Ampliação da Infraestrutura Analítica do Laboratório de Biomarcadores de Contaminação Aquática e Imunoquímica para o Desenvolvimento de Pesquisas Avançadas na Indústria do Petróleo, CCB, UFSC
Descrição: O objetivo deste projeto é ampliar a infra-estrutura do Laboratório para o desenvolvimento e aplicação de tecnologias inovadoras para avaliação da recuperação de áreas impactadas pela Indústria do Petróleo utilizando ferramentas bioquímicas e moleculares em estudos e/ou programas de biomonitoramento ambiental utilizando biomarcadores e animais aquáticos como espécies sentinelas..
2006 - 2009- Desenvolvimento de métodos moleculares e bioquímicos para avaliar os efeitos do esgoto doméstico em ambientes costeiros utilizando ostras do mangue Crassostrea rhizophorae
2006 - 2009 - Uso de ferramentas moleculares e bioquímicas em ostras Crassostrea gigas para avaliação dos efeitos do esgoto doméstico em ambientes costeiros
Descrição: O objetivo geral deste trabalho é a identificação de genes expressos diferencialmente na ostra nativa Crassostrea rhizophorae sob influência do lançamento de esgoto doméstico visando o desenvolvimento de técnicas e métodos de fácil aplicação para o biomonitoramento de regiões costeiras contaminadas por este tipo de aporte antrópico. Paralelamente, pretende-se interagir diretamente com a comunidade, através de atividades de educação ambiental com as populações urbanas e peri-urbanas usuárias do sistema hídrico..
2006 - 2008- Identificação de novos Biomarcadores moleculares de exposição a frações do óleo diesel na ostra do mangue Crassostrea brasiliana e no peixe Poecilia vivipara
Descrição: O objetivo geral deste projeto é a identificação de novos biomarcadores moleculares de exposição ao óleo diesel através da clonagem e sequenciamento de genes expressos diferencialmente em ostras C. rhizophorae e nos peixes Poecilia reticulata rerio expostos a frações alifáticas e aromáticas do óleo diesel para que possam ser futuramente utilizadas como ferramentas biotecnológicas para avaliação da contaminação aquática em ambientes marinho e estuarino. Os objetivos específicos deste projeto são: a) Clonar e sequenciar fragmentos de cDNA expressos diferencialmente em glândula digestiva de ostras tratadas com frações alifática e aromáticas do óleo diesel; b) Clonar e sequenciar fragmentos de cDNA expressos diferencialmente em fígado de peixes expostos a frações alifática e aromáticas do óleo diesel; c) A partir das sequências de cDNA identificadas nos items "a" e "b", desenhar e validar o uso de iniciadores para avaliar a resposta temporal da indução da expressão gênica em ostras expostas às frações alifáticas e aromáticas do óleo diesel através de reação de cadeia em polimerase com termociclador em tempo real. .
2006 - 2008 -Expressão dos genes PXR, CYP3C1 e ABCB5 em Zebrafish (Danio rerio) tratados com 17-alfa etinilestradiol e sais biliares.
Descrição: O receptor pregnano X (PXR) é um receptor nuclear envolvido na regulação transcricional de enzimas relacionadas com o metabolismo de endobióticos e xenobióticos. Em mamíferos, vários xenobióticos são conhecidamente agonistas ou antagonistas do PXR o que afeta diretamente a transcrição dos genes regulados por esse receptor como o citocromo P4503A (CYP3A) e o gene de resistência a multidrogas 1 (MDR1). Contudo, poucos são os estudos a respeito da função biológica dos homólogos do PXR em espécies de não-mamíferos. O Danio rerio (peixe-zebra) tem se tornado amplamente utilizado e aceito como espécie modelo em estudos toxicológicos e farmacológicos para a elucidação dos mecanismos moleculares desencadeados em doenças humanas e na identificação de vias de sinalização conservadas. O objetivo desse estudo foi avaliar a expressão in vivo dos genes PXR, CYP3C1 e ABCB5 no fígado de peixes-zebra tratados com os sais biliares Ciprinol, Ciprinol sulfato, Scimnol e Scimnol sulfato e o anticoncepcional 17 alfa-etinilestradiol. A partir do cDNA sintetizado de amostras do fígado está sendo a analisada a expressão de PXR, CYP3C1, ABCB5, β-ACTINA e Gliceraldeído 3-fosfato desidrogenase (GAPDH)..
2006 - 2008
Avaliação do estresse oxidativo em camarões Litopenaeus vannamei em resposta a infecção pelo vírus da mancha branca e ao tratamento com próbióticos
2006 - 2008 -Ações para o controle do vírus da mancha branca no cultivo de camarões marinhos
2006 - 2008 - Expressão diferencial de genes e proteínas em camarões infectados pelo vírus da mancha branca Biologia Molecular e Bioquímica Inovação, Diagnóstico e Treinamento
2004 - 2007 - Purificação e caracterização da Glutationa S-transferase (E.C. 2.5.1.18) de ostras Crassostrea rhizophorae (Guilding, 1828).
Descrição: O objetivo principal deste projeto é purificar e caracterizar a enzima de conjugação de xenobióticos Glutationa S-transferase de ostra nativa Crassostrea rhizophorae..
2004 - 2006 -Effects of petroleum PAHs on biochemical markers and on the structure and function of vision during fish early life stages
Descrição: The Brazilian environmental agencies need to establish guidelines for the evaluation of environmental risks associated with the petroleum industry to aquatic ecosystems, and research focused in local species is essential. Within this context, the evaluation of ecologically relevant biological endpoints is important. Additionally, the assessment of the potential molecular mechanisms associated with these more ecologically relevant effects will provide us with important knowledge that can help in the development of predictive models of population level effects for important fishery resources. Vision is essential for succesful survival, growth and recruitment of fishes, a critical ecological processes for the maintenance of fish populations. We intend to study the effects of petroleum associated PAHs on the visual system structure and function of early life stages of a native brazilian fish species. This approach will provide an interesting paradigm to evaluate links between contaminant effects from the suborganismal to the individual level of biological organization. Fish embryos will be exposed to relevant concentrations of petroleum contaminated water flowing through generator columns filled with oiled gravel, and larvae will be assessed for biological effects encompassing behavioral visual function, morphological, immunohistochemical and histological endpoints. At the end of this project we expect to generate peer reviewed scientific publications on the ontogenesis of visual development in the chosen species, and on the effects of petroleum contaminated water in the proposed biological endpoints. Additionally, recommendations regarding the regulation of concentrations of PAHs in the brazilian aquatic environments and the risks associated will be made..
2004 - 2005 - Estresse Oxidativo Hepático em Peixes da Família Poeciliidae Induzido por Naftaleno
Descrição: Este projeto pretende avaliar os efeitos do naftaleno como potencial indutor de estresse oxidativo em fígado de peixes da família Poeciliidae. A escolha desta família, se deve ao fato destas espécies serem abundantes e habitarem regiões dulciaquícolas e estuarinas desde os Estados Unidos até a Argentina. Além disso, muitas espécies desta família são conhecidas por sua resistência a contaminação orgânica, sendo comumente encontradas em regiões limpas e em córregos contendo resíduos de esgotos domésticos e pluviais. Um estudo sobre o mecanismo de ação do naftaleno no metabolismo de exemplares da família Poeciliidae contribuirá para aumentar o conhecimento científico sobre a gama de organismos aquáticos potenciais de serem utilizados em programas de avaliação e monitoramento ambiental no território brasileiro. Além disso, a pesquisa contribuirá para os conhecimentos a respeito dos biomarcadores envolvidos na biotransformação do naftaleno, bem como os efeitos desse xenobiótico nestes organismos. Os parâmetros bioquímicos propostos para serem analisados nesse projeto são as enzimas de defesa antioxidante, a expressão da isoforma de citocromo P450 (CYP1A) e os sistemas de conjugação de xenobióticos GST..
Financiador(es): Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico - Bolsa.
2003 - 2009 - Cloning and expression of the pregnane X receptor in Nile tilapia
Descrição: 1. Clone and sequencing the PXR gene from Nile tilapia; 2. Analyze the phylogenetic tree of nuclear receptors including Nile tilapia PXR; 3. Evaluate the expression of PXR in different tissues of Nile tilapia; 4. Analyze the PXR expression in different gonad stages; 5. Analyze the PXR expression in fish treated with CYP2B and CYP3A-type inducers..
Financiador(es): International Foundation For Science - Auxílio financeiro.
2003 - 2005 - Avaliação de biomarcadores de contaminação aquática em Farfantepenaeus paulensis e Farfantepenaeus brasiliensis coletados na Lagoa da Conceição, Florianópolis, SC
Descrição: A atividade da glutationa S-transferase (GST) foi avaliada em brânquias e hepatopâncreas de F. paulensis e F. brasiliensis coletados na Lagoa da Conceição no inverno e no verão. Os camarões foram transplantados para três áreas na Lagoa: Canto da Lagoa (CA), Canal da Barra (CB) e Costa da Lagoa (CO), e um grupo foi mantido em laboratório (LAB), onde permaneceram por 2 (t1), 7 (t2) e 15 (t3) dias. Foram analisados 80 espécimens de F. paulensis, 54 no inverno e 26 no verão, e 148 de F. brasiliensis, 55 no inverno e 93 no verão.
2002 - 2004 - Identificação de proteínas ligantes a metais no mexilhão Perna perna exposto a cádmio
Descrição: Metalotioneínas (MT) são proteínas de baixo peso molecular, termoresistentes e ricas em cisteína. Devido a sua afinidade por metais - traço, tem sido sugerido que em organismos aquáticos estas proteínas atuem na homeostase e detoxificação de metais essenciais (Cu e Zn) e não essenciais (Cd e Hg). Além disso, as MT poderiam estar envolvidas na resistência a metais em organismos expostos a estes compostos. O objetivo deste estudo foi identificar e caracterizar a presença de MT em glândula digestiva do mexilhão Perna perna para verificação da validade destas proteínas como biomarcador de contaminação por metais. Dois grupos de animais foram expostos a Cd (300 mg/L) por 7 e 15 dias. Um terceiro grupo foi mantido como controle não exposto. As glândulas digestivas foram retiradas, homogeneizadas e centrifugadas. Os sobrenadantes foram submetidos a cromatografia de filtração em gel (Sephadex G-75). Uma fração correspondente a proteínas de baixo peso molecular (faixa de PM = 20 - 10 kDa) foi observada nos animais expostos a cádmio. Estes resultados estão de acordo com o perfil de eluição das amostras expostas a cádmio obtido por cromatografia líquida de alta performance (Shimadzu), em uma coluna de exclusão molecular (DIOL - 150). A presença de Cd foi detectada nesta fração de baixo peso molecular através de análises químicas em ICP - MS. As amostras de sobrenadante e as frações obtidas por HPLC foram submetidas a eletroforese em gradiente (PAGE - SDS). Uma banda correspondente a uma proteína com peso molecular aparente de 16 kDa foi detectada nos animais expostos a Cd por 15 dias. O aumento na expressão de proteínas ligantes a metais nesta espécie pode ser atribuído a um papel na defesa contra metais e pode ser uma perspectiva relevante para o uso destas proteínas em programas de biomonitoramento..
2001 - 2006 - Bases moleculares da resistência de mexilhões Perna perna a ambientes costeiros contaminados
Descrição: Ao longo do primeiro ano de desenvolvimento deste projeto, foram obtidos resultados bastante interessantes e originais sobre o mecanismo de resistência do mexilhão Perna perna. Estudos da expressão da Pgp foram realizados através da técnica de western blot utilizando como anticorpo primário, o anticorpo C219, que detecta o epítopo presente em todas as Pgps conhecidas, incluindo os produtos dos genes mdr1 (envolvidos na resistência à múltiplas drogas) e mdr2 (envolvidos na secreção de fosfolipídeos e não do mecanismo MDR) de mamíferos, assim como as sPgp ( sister of P-glycoproteins ) envolvidas no transporte de ácidos biliares. Após um período inicial de padronização foi estabelecido o protocolo para quantificação da Pgp no mexilhão P. perna. A Figura 1 mostra o resultado da padronização desta técnica evidenciando a existência de uma banda protéica reativa e específica ao anticorpo C219 de peso molecular aparente semelhante ao esperado para Pgp, que é de 170 kDa. Através da realização de experimentos em que as membranes foram incubadas apenas ao anticorpo secundário, foi verificada a existência de outras bandas protéicas inespecíficas reativas ao anticorpo secundário, mas não reativas ao anticorpo primário. A partir desta padronização foram realizados experimentos de campo em que mexilhões foram mantidos em dois locais: um considerado como região referência ou controle (Praia do Sambaqui) e outro em uma região que possui suspeita de contaminação por esgoto doméstico, considerado como exposto (próximo a Ponte Hercílio Luz). .
Financiador(es): Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico - Bolsa / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico - Auxílio financeiro.
2004 - Atual - Expressão diferencial de genes em Crassostrea rhizophorae expostas a efluentes domésticos.
Descrição: Neste projeto pretendemos analisar o padrão de expressão gênica diferencial em brânquias de ostras Crassostrea rhizophorae expostas a esgoto doméstico. Assim, para avaliar quais genes da ostra tem sua expressão induzida ou reprimida por poluentes presente nos efluentes domésticos, a estratégia a ser empregada é a hibridização subtrativa. Através da identificação de genes que tenham sua expressão alterada pela presença de contaminantes, pretende-se auxiliar na elucidação dos mecanismos de toxicidade dos xenobióticos lançados no esgoto doméstico, bem como identificar possíveis marcadores e novos biomarcadores de contaminação aquática nesta espécie de molusco..
2003 - 2005 - Avaliação de biomarcadores bioquímicos em camarão-rosa, Farfantepenaeus paulensis, coletados na Lagoa da Conceição, Ilha de Santa Catarina, SC, Brasil
Descrição: A Lagoa da Conceição (LC), Ilha de Santa Catarina, SC, representa um complexo de elevada importância econômica para a comunidade local, destacando-se a tradicional pesac artesanal dos camarões-rosa. Em função do processo celerado de expansão urbana, aliado ao turismo desordenado, a Lagoa tem testemunhado uma explosão irracional dos seus recursos naturais, com impactos sobre os recursos pesqueiros na região. Dentro deste contexto, a presente proposta tem por objetivo avaliar dois biomarcadores, níveis de Metalotioneína (MT) e atividade da Glutationa-S-Transferase (GST), em camarões -rosa transplantados para três áreas distintas da LC, onde permanecerão por um período de 15 dias, em duas estações, inverno e verão. Paralelamente, será realizado um estudo sobre a ocorrência e a distribuição sazonal destas espécies de camarões em LC..
Financiador(es): Fundação de Amparo à Pesquisa e Inovação do Estado de Santa Catarina - Auxílio financeiro.
2002 - 2003 -Influência da salinidade sobre respostas bioquímicas em ostras-do-mangue (Crassostrea rhizophorae) expostas a óleo diesel
Descrição: A costa brasileira vêm recebendo nas últimas décadas um significativo aporte de contaminantes de origem antropogênica, incluindo o petróleo e seus derivados. Como conseqüência disso, ecossistemas como os mangues e estuários, caracterizados por possuir amplas variações de salinidade e outros parâmetros ambientais, são alguns dos ecossistemas mais afetados. Um dos animais que habita estes ambientes, e que apresenta uma ampla distribuição na costa brasileira é a ostra-do-mangue (Crassostrea rhizophorae), um molusco eurialino e osmoconformista. O objetivo deste estudo foi observar a influência da salinidade (35, 25, 15 e 9 %o) sobre a atividade das enzimas GST, CAT e AChE, em brânquias de C. rhizophorae expostas por 7 dias às concentrações de 0,001, 0,01 e 0,1 % de óleo diesel e posteriormente submetidas a depuração por um período de 24 horas e 7 dias. A enzima GST apresentou um aumento dose-dependente de atividade, nas salinidades de 25 e 15 %o, e uma tendência de aumento na maior concentração (0,1 %) para as salinidades de 35 e 9 %o. A enzima CAT não apresentou alterações entre os grupos, enquanto a AChE mostrou um aumento de atividade no grupo depurado por 7 dias para a maior concentração de óleo (0,1 %) em relação a menor concentração (0,001 %), apenas na salinidade de 25 %o. A maior toxicidade do óleo diesel foi observada na salinidade de 35 %o, para a concentração de 0,1 %, onde houve mortalidade significativa dos animais (53 %). Os resultados obtidos sugerem que a atividade da GST em brânquia de C. rhizophorae poderia servir como um biomarcador de contaminação aquática em casos de contaminação por óleo diesel em condições de salinidades intermediárias entre 25 e 15 %o. .
Situação: Concluído; Natureza: Pesquisa.
Situação: Concluído; Natureza: Pesquisa.
Financiador(es): Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico - Auxílio financeiro.
2001 - 2002 -Análise in situ dos efeitos tóxicos de efluentes industriais e agrícolas sobre biomarcadores bioquímicos em peixes, na região de Joinville, SC
Descrição: Joinville, a maior cidade do estado de Santa Catarina, possui mais de 200 indústrias altamente poluidoras. Estudos prévios realizados nesta região pela Fundação do Meio Ambiente (FATMA) observaram que em alguns rios, particularmente o "Rio do Braço" mostraram alta toxicidade para Daphnia magna e Danio rerio (LOPES et al., 5º Ecotox, Itajaí, SC, 1998). O objetivo deste estudo foi analisar alguns biomarcadore de contaminação em tilápias (Oreochromis niloticus) engaioladas e colocadas em dois pontos do "Rio do Braço" (RB1 - perto de efluentes industriais; RB2 - aproximadamente um Km distante do local de despejo), e um local de referência (REF1 - "Fundação 25 de Municipal Julho"). Após sete dias, os animais foram mortos para a obtenção de sangue, cérebro e fígado. No fígado foram analisadas a expressão da isoforma CYP1A e da glicoproteína-p (PgP), as atividades das enzimas colinesterase (ChE), glutationa S-transferase (GST) e catalase (CAT). No sangue foi analisada a concentração de hemoglobina. No plasma foram analisadas as atividades das enzimas alanina aminotransferase (ALT), aspartato aminotransferase (AST) e a capacidade antioxidante. Nos eritrócitos foi analisada a atividade da ?-aminolevulinato desidratase (?-ALA-D), e no cérebro foi analisada a atividade da colinesterase (ChE). Todos os peixes colocados em RB1 morreram antes de 8 horas de exposição, provavelmente devido às condições anóxicas observadas neste local. Os animais mantidos em RB2 apresentaram níveis significativamente maiores da atividade da CAT (129%), GST (26,7%) e CYP1A (448%) hepáticas e AST (23%) e ALT (67%) plasmáticas que nos animais da região referência. que os organismos mantidos no "Rio do Braço" foram expostos a uma condição de estresse químico, evidenciado pelos elevados níveis hepáticos de CYP1A, CAT e GST e plasmáticos das AST e ALT, respectivamente, biomarcadores de exposição a compostos orgânicos no ambiente e indicadores de lesão tecidual..
Financiador(es): Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico - Auxílio financeiro
2001 - 2003 - Análise in situ dos efeitos tóxicos de efluentes industriais e agrícolas sobre marcadores bioquímicos em peixes, na região de Joinville, SC.
Descrição: Neste estudo foram analisados alguns biomarcadores de contaminação aquática em tilápias, Oreochromis niloticus, expostos in situ, em gaiolas, em dois pontos do Rio do Braço, localizados no município de Joinville. Os animais foram mantidos nos pontos citados por um período de sete dias.Os biomarcadores CYP1A, PgP, ChE, GST, CAT foram analisados no fígado. No sangue foram analisadoas a capacidade antioxidante total, as enzimas ALT e AST. A atividade da enzima delta-aminolevulinato desidratase (delta-ALA-D) foi analisada nos eritrócitos. Com base nos biomarcadores analisados, foi concluído que os animais mantidos nestes locais foram expostos a uma condição de estresse químico, evidenciado pelos biomarcadores de exposição a compostos orgânicos no ambiente (níveis elevados de CYP1A, CAT e GST) e indicadores de lesão tecidual (níveis plasmáticos deAST e ALT)..
Situação: Concluído; Natureza: Pesquisa.
2001 - 2003 -Identificação de marcadores bioquímicos no mexilhão Perna perna para avaliar a contaminação da zona costeira.
Descrição: Entre os principais problemas ocasionados pelos contaminantes no ambiente marinho, podemos citar a toxicidade, a persistência e a bioacumulação na cadeia alimentar. Dada a necessidade de detectar e avaliar o impacto de poluentes sobre a qualidade ambiental a importância de programas de monitoramento do ambiente aquático tem sido enfatizada. Entre as metodologias empregadas nestes programas está o emprego das respostas de organismos bioindicadores. O cultivos de moluscos marinhos no estado de Santa Catarina vem, cada vez mais, crescendo e se firmando como uma fonte alternativa real de recursos para as comunidades pesqueiras. Assim, para que esta atividade possa ter continuidade dentro de uma perspectiva de desenvolvimento sustentável, a qualidade das áreas de cultivo devem ser monitoradas com um conjunto abragente de ferramentas. Dentro desta perspectiva, o objetivo deste estudo é avaliar os níveis das proteínas de estresse HSP 70 e HSP60 e a atividade da enzima de conjugação Glutationa-S-Transferase em mexilhões Perna perna em condições de laboratório e de campo. A análise destes biomarcadores contribuirá para o conhecimento das respostas bioquímicas desta espécie de molusco, visando estabelecer um conjunto de biomarcadores mais adequado para o monitoramento das áreas de cultivo e para assegurar a qualidade do mesmo como produto para consumo..
Situação: Concluído; Natureza: Pesquisa.
Situação: Concluído; Natureza: Pesquisa.
Financiador(es): Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico.
2000 - 2001 - Expression of multixenobiotic resistance (P-glycoprotein) in the mussel Perna perna
Descrição: Previous studies done by our group have observed that the mussel P. perna is able to survive in contaminated sites showing only discrete changes in biochemical systems. The mechanism responsible for such adaptation is not clearly established. One possible explanation could be the presence of a efficient defense mechanism involving the expression and activity of the p-glycoprotein (Pgp), a membrane transporter responsible for pumping out the xenobiotic from the cell. In this study we established the protocol for measuring the Pgp-like protein in gill extracts of P. perna caught at mussel farming areas and at the natural environment at rocky substrates. Samples were collected in July, September, December 2000 and March 2001. Gills were immediately excised and homogenized in buffer and centrifuged for 10 minutes at 10,000g. The proteins of the supernatant were electrophoretically separated in 7.5 % poliacrylamide gels (BioRad Mini Protean II) and transferred to Hybond ECL-NC membrane according to conventional procedures, followed by several modifications. C219 monoclonal Ab (Signet Laboratories) diluted at 1:300, was used as primary antibody. This Ab recognizes an internal highly conserved amino acid sequence in both Mdr1 and Mdr3 isoforms of Pgp. The secondary Ab used was goat anti-mouse peroxidase-conjugated diluted at 1:5,000 . Incubating the membrane only with the secondary Ab, we could detect three non-specific cross-reacting proteins with apparent molecular weight (MWap) of 250, 100 and 50 kDa in gill of P. perna. However, a specific protein with MWap 170 kDa (the expected molecular weight for Pgp) was observed when the membrane was incubated with C219 and the secondary Ab. Comparing the Pgp expression of the mussels caught at the farmed and natural populations, no significant differences were observed. Likewise, no differences were observed in the Pgp expression in the mussel from both sites around the year. High coefficient of variability was observed..
1984 - 1985 -Isolamento e caracterização de proteínas do veneno de Crotalus durissus.
Descrição: O projeto envolveu o desenvolvimento e a padronização de métodos cromatográficos para o fracionamento do veneno de Crotalus sp e a caracterização das frações proteicas obtidas. Além da caracterização imunoquímica, as frações foram avaliadas em testes farmacológicos in vivo, utilizando-se camundongos. Esta etapa foi realizada em colaboração com o Departamento de Farmacologia, FCM da Unicamp..
Situação: Concluído; Natureza: Pesquisa.
Situação: Concluído; Natureza: Pesquisa.
Financiador(es): Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo - Auxílio financeiro.